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乙?*?酶活性試劑盒
閱讀：271 發布時間：2017-9-27| 提 供 商 | 齊一生物科技（上海）有限公司 | 資料大小 | 23.3KB |
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乙?*?酶?acetylcholinesterase?AchE?活性測定試劑盒說明書
分光光度法 50 管/48 樣
注意?正式測定之前選擇 2-3 個預期?異大的樣本做預測定?
測定意義?
AchE 屬于*水解酶?廣泛存在于各種動物組?和血清中?AchE催化乙?*?Ach?
水解?在神?傳導調節中起重要作用?
測定原理?
AchE 催化Ach水解生成*?*與二硫對硝基苯甲酸?DTNB?作用生成 5-?基-硝基苯
甲酸?TNB??TNB 在 412nm 處有吸收峰?通過測定 412 nm 吸光度增?速率??算 AchE
活性?
乙?*?酶?acetylcholinesterase?AchE?活性測定試劑盒說明書 自備儀器和用品?
可見分光光度???溫離心機?水浴鍋?可調式移液槍?1mL 玻璃比色皿和蒸餾水?
試劑組成和配制?
提取液?液體×1 瓶?4℃保存?
試劑一?液體×1 瓶?4℃保存?
試劑二?粉劑×1 瓶?4℃保存?臨用前?入 2.6mL試劑一?充分震蕩溶解?
試劑й?粉劑×1 瓶?4℃保存?臨用前?入 2.6mL試劑一?充分震蕩溶解?
粗酶液提取?
1. 組??按照組?質??g??提取液體?(mL)為 1?5~10的比例?建議?取約 0.1g 組??
?入 1mL提取液?進行冰浴勻漿?8000g 4℃離心 10min?取к清液待測?
2. ?菌?真菌?按照?胞數??104
個??試劑一體??mL?為 500~1000?1 的比例?建
議 500萬?胞?入 1mL提取液??冰浴超聲波破碎?胞??率 300w?超聲3 。?間隔 7
。?總時間 3min??然后 8000g?4℃?離心 10min?取к清置于冰к待測?
3. 血清等液體?直接測定?
乙?*?酶?acetylcholinesterase?AchE?活性測定試劑盒說明書 測定操作?
1. 分光光度?預熱 30 min?調節波長到 412 nm?蒸餾水調零?
2. 試劑二置于 37℃水浴中預熱 30min?
3. 空白管?取 1mL玻璃比色皿?依次?入 100µL 蒸餾水?800 µL試劑一?50µL試劑二和
50 µL試劑й?迅速混勻?于 412nm處測定3min 內吸光值變化?第 10s吸光值記為 A1?第
190s吸光值記為A2?△A空白管=A2ˉA1
4. 測定管?取 1mL玻璃比色皿?依次?入 100µL к清液?800 µL試劑一?50µL試劑二和
50 µL試劑й??迅速混勻?于 412nm處測定 3min 內吸光值變化?第 10s吸光值記為A3?
第 190s吸光值記為A4?△A測定管=A4-A3
注意?空白管只需測定一次?
AchE 活性?算公式?
1. 組?AchE 活性
?1?按照蛋白濃度?算
活性單?定義??毫克蛋白?分鐘催化產生 1nmol TNB 的酶?為 1個酶活單??
AchE 酶活(nmol/min/mg prot)= [(△A 測定管-△A空白管)÷ε÷d×V 反總×109
]÷ ?Cpr ×V樣? ÷T
= 245×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr
?2?按照樣本質??算
活性單?定義??克組??分鐘催化產生 1nmol TNB 的酶?為 1個酶活單?? AchE酶活(nmol/min/g鮮重)= [(△A測定管-△A空白)÷ε÷d×V反總×109
]÷ ?W ×V樣÷V樣總?
÷T
= 245×(△A測定管-△A空白管)÷W
2. ?菌??胞AchE 活性
活性單?定義?? 104
個?胞?分鐘催化產生 1nmol TNB 的酶?為 1 個酶活單??
AchE酶活(nmol/min/104
cell)= [(△A測定管-△A空白)÷ε÷d×V反總×109
]÷ ??胞數?×V樣÷V
樣總?÷T
= 245×(△A測定管-△A空白管)÷?胞數?
3. 血清AchE 活性
活性單?定義??毫升血清?分鐘催化產生 1nmol TNB 的酶?為 1個酶活單??
AchE 酶活(nmol/min /mL)= [(△A測定管-△A空白管)÷ε÷d×V反總×109
]÷×V樣÷T
=245×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr
ε?TNB摩爾消光系數?13.6×103
L/mol/cm?V 反總?反應體系總體??L??1 mL=0.001 L?
106
?1mol=1×106
µmol?V 樣總??入提取液體??1mL?Cpr?蛋白濃度?mg/mL??W?
乙?*?酶?acetylcholinesterase?AchE?活性測定試劑盒說明書 樣本質??g?V樣??入к清液體??mL??0.1 mL?T?反應時間?min??3 min?