micRNA檢測:要了解miRNA在基因調控中扮演的角色,很關鍵的一個方法就是迅速、準確地定量檢測miRNA基因的表達。因此,miRNA表達水平的檢測也成為了科學家們研究的熱點。但是由于小分子RNA是一類很小的分子,部分小分子RNA表達水平可能很低,因而需要極為靈敏而定量的分析工具。

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MiRNA檢測方法要了解miRNA在基因調控中扮演的角色,很關鍵的一個方法就是迅速、準確地定量檢測miRNA基因的表達。因此,miRNA表達水平的檢測也成為了科學家們研究的熱點。但是由于小分子RNA是一類很小的分子,部分小分子RNA表達水平可能很低,因而需要極為靈敏而定量的分析工具。
常用的檢測方法有:
1. Northern blotting
2. 核糖核酸酶保護分析以及基于此方法的液相雜交。
3. RT-PCR也被用來檢測miRNA前體的表達水平, 其他基于PCR技術檢測miRNA的方法有引物延伸法,就是在引物的5 末端加一個特異標記,可以定量測定低豐度的RNA含量;原位雜交技術(CISH,FISH)可以方便的檢測miRNA的時空表達的差異。
4. 芯片(microarrays)技術[46,47]是一種較快的研究miRNA表達的方法。
micRNA檢測實驗流程:
取材-RNA提取逆轉錄成cDNA—熒光定量PCR-(PCR產物電泳)-數據分析-發報告
miRNA采取特異性逆轉錄,采用的是莖環法
送樣運輸要求:
動物組織:100 mg(黃豆大小),zui少50 mg(綠豆大小),脂肪組織,結締組織,纖維化組織適當增加,干冰運輸。
細胞:1×10^6個細胞。細胞沉淀或加入trizol的細胞樣本(不要直接運輸加trizol的細胞培養皿),干冰運輸。
全血:zui少1 mL新鮮血液EDTA抗凝管,4度運輸。
血清:zui少1 mL,干冰運輸。
植物:新鮮的葉、果肉、種子等需100 mg,干冰運輸。
RNA樣品: OD260/280為1.8-2.0,濃度≥100 ng/μL,體積≥20μL,干冰運輸。
cDNA:cDNA原液≥20 μL,干冰運輸。