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(Pro)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,逆境條件下,植物體內 Pro 含量顯著增加。Pro 增加量在一定程度上反映了抗逆性,抗旱性強的品種往往積累較多的。因此, 增加量可以作為抗逆育種的生理指標之一。
用磺基水楊酸(SA)提取 Pro,加熱處理后,Pro 與酸性茚三酮溶液反應生成紅色;加甲苯萃取后,在 520nm 測定吸光度。
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL 玻璃比色皿、冰乙酸、甲苯、研缽、冰和蒸餾水。
1、細胞、細菌或組織樣品的制備 :
細菌或細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,棄上清;按照每 100 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液, 超聲波破碎細菌或細胞(功率 20%,超聲 3 秒,間隔 10 秒,重復 30 次),之后置沸水浴振蕩提取 10min;10000g,常溫離心 10min,取上清,冷卻后待測。
組織:稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿;之后置沸水浴振蕩提取 10min,10000g, 常溫離心 10min,取上清,冷卻后待測。
2、血清(漿)樣品:取 100μL 血清(漿)加入 0.9mL 提取液,充分混勻,之后置沸水浴振蕩提取
10 分鐘,10000g,常溫離心 10 分鐘,取上清,冷卻后待測。
3、標準品的處理:稱取 1mg,將標準品稀釋為 15、10、8、6、4、2、1、0 μg/ml。
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